期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办。本刊以广大风湿病学医师为主要读者对象，报道风湿病学领域领先的科研成果和临床诊疗经验，以及对风湿病学临床有指导作用、且与风湿病学临床密切结合的基础理论研究。本刊设有专论、论著、基础研究、临床研究、短篇论著、综述、讲座、病例报告、临床病理（病例）讨论、国内外学术动态等栏目。
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首页>中华风湿病学杂志
- 杂志名称：中华风湿病学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1007-7480
- 国内刊号：14-1217/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1998年，《中华风湿病学杂志》社被共青团省委、山西省卫生厅授予“青年文明号”荣誉称号期刊收录：上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
抗SSA噬菌体抗体库的构建及鉴定
周炜；张奉春；唐福林；董怡
关键词：自身抗原, 细菌噬菌体, 抗体
摘要：目的用噬菌体展示技术构建抗SSA单链抗体库.方法分离抗SSA抗体阳性病人外周血单个核细胞,提取RNA并反转录cDNA.扩增免疫球蛋白重链可变区(VH)和κ链可变区(Vκ).通过重叠聚合酶链反应(PCR)用连接片段将VH和Vκ体外连接成单链抗体(single-chain Fv,scFv)基因.而后用SfiⅠ和NotⅠ酶切并与噬菌粒pHEN2连接;将pHEN2-scFv电转至大肠杆菌TG1,建立抗SSA scFv cDNA库.随机挑选克隆用PCR扩增插入片段了解插入效率.用辅助噬菌体VCS-M13感染含pHEN2-scFv的TG1,产生scFv噬菌体抗体.用酶联免疫吸附(ELISA)检测构建的scFv噬菌体抗体库中有无抗SSA抗体存在.结果与VH和Vκ支架结构互补的引物可扩增出300～400 bp大小VH和Vκ片断;重叠PCR体外连接成约800 bp大小scFv基因(VH-linker-Vκ).将scFv基因克隆至pHEN2,电转TG1后计数克隆数为3.0×107 cfu.随机挑选12个克隆,其中11个克隆PCR扩增出插入片段,插入效率约为91%.用辅助噬菌体VCS-M13感染含pHEN2-scFv的TG1后,产生1.2×1014pfu/ml噬菌体抗体颗粒.抗SSA ELISA试剂盒检测其抗SSA活性,scFv噬菌体抗体的A值比相同稀释度的VCS-M13的A值高2.0～2.2倍.结论建立的抗SSA scFv噬菌体抗体库含有的独立克隆数为3.0×107 cfu,插入效率约91%,ELISA检测证实此抗体库中存在抗SSA抗体.可进一步进行亲和力筛选以得到单克隆抗SSA scFv抗体.
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